锐赛生物
靶标发现与功能验证基因操作和基因组编辑药物靶标开发生化/细胞水平验证高通量高内涵分析GPCR/核受体检测激酶检测体外药理学体外安全性评价药代动力学毒理学评价药代动力学/毒理学抗肿瘤药理评价代谢类和心脑血管疾病药理评价中枢神经系统药理评价炎症/自身免疫疾病药理评价体内药理学立项成果展示QPCRWB检测ELISA检测甲基化检测SNP检测高效液相色谱法(HPLC)蛋白质谱基因芯片核酸、蛋白分析服务目的基因的ORF克隆化学合成质粒载体构建siRNA的细胞转染及筛选技术服务shRNA载体构建及筛选技术服务RNAi病毒包装及筛选技术服务miRNA的表达载体构建及病毒包装载体构建及筛选服务chipchip-seqIPCO-IPRNA免疫共沉淀(RIP)RNA pull down免疫共沉淀实验服务慢病毒包装腺病毒包装细胞培养原代细胞分离干细胞诱导分化CCK-8检测流式周期检测流式凋亡检测流式分选细胞流式鉴定细胞表面抗体活性氧(ROS)检测线粒体膜电位检测transwell检测管腔形成实验细胞黏附实验细胞克隆形成实验细胞免疫荧光检测稳转株构建双荧光素酶检测细胞干性成球能力磁珠分选细胞MDA(丙二醛)检测酶活动力学检测HDA检测细胞实验服务常规化学染色免疫组化(IHC)免疫荧光(IF)原位杂交(ISH)荧光原位杂交(FISH)原位末端标记染色(TUNEL)组织样本处理拍照处理病理学检测服务裸鼠皮下成瘤(CDX模型)人源肿瘤移植模型(PDX模型)糖尿病/肥胖模型心血管类疾病模型肾脏疾病模型肝脏疾病模型炎症与自身免疫疾病模型呼吸系统疾病模型其他疾病模型动物实验服务u.cad癌症筛查检测全外显子组基因检测其他疾病基因检测生物信息数据分析服务肿瘤学领域研究平台病理学中心实验室心血管与代谢领域疾病研究平台炎症与自身免疫疾病领域研究平台特发肺纤维化疾病领域研究平台抗体药物一体化临床前研发平台药性评价平台POLOdeliverer3000CCK-8Annexin V-FITCAnnexin V-RFPECL 发光液细胞周期与凋亡检测自研试剂基因质粒病毒免费送细胞库动物饲料公司新闻案例库漂亮SCI科研转化成果价值金字塔三元悖论为客户赢得荣誉诚觅英才内部推荐加入我们留言板皇冠赌场我们推荐朋友SCI论文发表奖励制度科研资助促销活动
解读外泌体—锐赛生物为您助力高分文章(上)
文章附图

锐赛生物 昨天


解读外泌体


外泌体(Exosome),是一种能被大多数细胞分泌的微小膜泡,具有脂质双层膜结构,直径大约40-100 nm。最早时,外泌体只被认为是细胞的“垃圾袋”,让细胞摆脱一些无用蛋白,但在最近数年研究中发现,外泌体所携带的的“货物”具有重要的生物学意义,尤其外泌体所包含的许多RNA分子已被证实会参与到肿瘤发生等重要疾病发生过程。且由于外泌体的特殊组成,保证它能够广泛参与到细胞通讯过程中,具有很好的药物释放系统开发潜力。

3.jpg


最近的研究发现外泌体在很多生理病理上起着重要的作用,如免疫中抗原呈递、肿瘤的生长与迁移、组织损伤的修复等。不同细胞分泌的外泌体具有不用的组成成分和功能,可作为疾病诊断的生物标志物。外泌体具有脂质双层膜结构,能很好的保护其包被的物质,且能靶向特定细胞或组织,因此是一种很好靶向给药系统(targeted delivery system)。近年来,随着精准医学概念的提出,越来越多的人开始关注如何能做到疾病的精确诊断和治疗。外泌体作为一个新型的研究热点,由于它在体内存在的广泛性和获取的便捷性,已经成为了疾病诊断治疗的潜在有效方式,在精准医学发展上有着光明的前景。

4.jpg

(图源:The Scientist - Théry (2011))


外泌体分离方法


分离方法


机制

优点

弱点

差速离心

该方法由几个离心步骤组成,旨在去除细胞,大囊泡和碎片,沉淀外泌体。

差速离心是用于从生物体液和培养基分离外泌体的标准和非常普遍的方法。

当粘性生物体液诸如血浆和血清用于分析时,此方法的效率较低。

密度梯

度离心

这种方法以蔗糖密度梯度超速离心。

该方法允许从其他囊泡,颗粒和污染物中分离低密度外泌体。

对离心时间非常敏感。

体积排

阻层析

体积排阻层析分离基于它们的大小。它使用填充有多孔聚合珠的柱子。

该方法允许大小分子的精确分离,和不同溶液的应用。相比离心方法,通过色谱分离的外泌体的结构不会受到剪切力的影响。

该方法需要很长的运行时间,这限制了色谱分离法在处理多个生物样品时的应用。

过滤

超滤膜用于从蛋白质和其它大分子分离外泌体。外泌体群集中在膜上。

过滤允许小颗粒和可溶性分子分离自外泌体。在此过程中外泌体群富集于滤膜。

外泌体可能附着在过滤膜,下面的分析步骤就流失了。另外,由于待分析的液体通过膜时施加了额外的力,外泌体可能变形或损坏。

基于聚合

物的沉淀

该技术包括生物体液和含聚合物的沉淀溶液的混合,保温步骤和低速离心。

沉淀的优点包括对分离外泌体的温和作用和使用中性pH。

基于聚合物的沉淀法共分离了非囊泡污染物,包括脂蛋白。此外,聚合物材料的存在可能与下游分析不能兼容。

免疫分离

应用各种免疫学方法。结合了特异性抗体的磁珠用于分离外泌体。此外,基于ELISA的分离方法也有发展。

该方法允许所有外泌体或外泌体的选择性亚型的分离。此外,它也适用于外泌体蛋白质的定性和定量。

该方法不适用于大量样品。此外,分离的囊泡可能失去功能活性。

通过筛

分隔离

该技术通过膜筛分外泌体和由压力或电泳进行过滤。

相对较短的分离时间,并分离到高纯度的外泌体。

分离的外泌体回收率低。


经典案例


以下为外泌体应用相关文献案例解析:


循环肿瘤细胞和胞外囊泡的RNA表达谱分析用于转移性乳腺癌患者的分类治疗


MBC

转移性乳腺癌:不可治愈性、异质性,检测marker不确定,治疗免疫逃逸

检测marker:CTC、Evs;但其中mRNA的相关性是不清楚的CTC与Evs检测指标之间的差异,显示不同的治疗监测情况。


实验方法

根据患者预后分型采集不同治疗时间点的血液样本

5.jpg


CTC分离提取及Evs分离提取:

2*9 mL of peripheral blood was collected in S-Monovettes 9 mL of K3E (1.6 mL of EDTA/mL; Sarstedt AG), stored at 4 °C, and processed within 4 h after blood draw.

CTCs were isolated from 5 mL of blood by positive immunomagnetic selection targeting EpCAM, EGFR,and HER2 (AdnaTest EMT-2/StemCell SelectTM,QIAGEN)

3000g for 8 min  obtained plasma   3000g for 8 min

3000g for 8 min 0.8-mpore size syringe filter (Sartorius)

by affinity-based binding to a spin column (exoEasy spin column, QIAGEN) total RNA was isolated and purified

6.jpg

qPCR-Array:

mRNA ISOLATION AND REVERSE TRANSCRIPTION

QUANTITATIVE PCR——The AdnaTest TNBC Panel prototype

AKT2, ALK, AR, AURKA,BRCA1, EGFR, ERCC1, ERBB2, ERBB3, KIT, KRT5,MET, MTOR, NOTCH1, PARP1, PIK3CA, SRC,GAPDH

DATA EVALUATION


实验结果

7.jpg
8.jpg
9.jpg
10.jpg
11.jpg


肿瘤来源外泌体对肿瘤具有抑制或促进的双重作用,这可能是外泌体、细胞和环境因素之间复杂相互作用的结果,与肿瘤进展程度和机体免疫状态密切相关。关于外泌体的研究是肿瘤学的一个新兴领域,在转化医学的研究模式下,将极大推动肿瘤学研究进展,为肿瘤临床诊断和治疗带来新的契机。


更多精彩内容 请关注锐赛生物下次分享


关注最光荣图.jpg
锐赛二维码.jpg

锐赛生物

电话:021-64197338

全国服务热线:137-6147-5994

Email:Service@research-bio.com

地址:上海市浦东新区康新公路3399弄

(时代医创园)25号楼17层

快,关注锐赛生物,一起涨姿势~

20180525


QQ客服
 
 
 工作时间
周一至周五 :9:00-18:00
 皇冠赌场方式
客服热线:13761475994 (肖经理)
邮箱:service@research-bio.com
注:不用QQ的可点击网页右侧按钮在线咨询
赠送技术手册
 
 
技术服务手册

锐赛新版技术手册

填写皇冠赌场地址信息即赠送!

点击

沪公网安备 31011502005995号