锐赛生物
靶标发现与功能验证基因操作和基因组编辑药物靶标开发生化/细胞水平验证高通量高内涵分析GPCR/核受体检测激酶检测体外药理学体外安全性评价药代动力学毒理学评价药代动力学/毒理学抗肿瘤药理评价代谢类和心脑血管疾病药理评价中枢神经系统药理评价炎症/自身免疫疾病药理评价体内药理学立项成果展示QPCRWB检测ELISA检测甲基化检测SNP检测高效液相色谱法(HPLC)蛋白质谱基因芯片核酸、蛋白分析服务目的基因的ORF克隆化学合成质粒载体构建siRNA的细胞转染及筛选技术服务shRNA载体构建及筛选技术服务RNAi病毒包装及筛选技术服务miRNA的表达载体构建及病毒包装载体构建及筛选服务chipchip-seqIPCO-IPRNA免疫共沉淀(RIP)RNA pull down免疫共沉淀实验服务慢病毒包装腺病毒包装细胞培养原代细胞分离干细胞诱导分化CCK-8检测流式周期检测流式凋亡检测流式分选细胞流式鉴定细胞表面抗体活性氧(ROS)检测线粒体膜电位检测transwell检测管腔形成实验细胞黏附实验细胞克隆形成实验细胞免疫荧光检测稳转株构建双荧光素酶检测细胞干性成球能力磁珠分选细胞MDA(丙二醛)检测酶活动力学检测HDA检测细胞实验服务常规化学染色免疫组化(IHC)免疫荧光(IF)原位杂交(ISH)荧光原位杂交(FISH)原位末端标记染色(TUNEL)组织样本处理拍照处理病理学检测服务裸鼠皮下成瘤(CDX模型)人源肿瘤移植模型(PDX模型)糖尿病/肥胖模型心血管类疾病模型肾脏疾病模型肝脏疾病模型炎症与自身免疫疾病模型呼吸系统疾病模型其他疾病模型动物实验服务u.cad癌症筛查检测全外显子组基因检测其他疾病基因检测生物信息数据分析服务肿瘤学领域研究平台病理学中心实验室心血管与代谢领域疾病研究平台炎症与自身免疫疾病领域研究平台特发肺纤维化疾病领域研究平台抗体药物一体化临床前研发平台药性评价平台POLOdeliverer3000CCK-8Annexin V-FITCAnnexin V-RFPECL 发光液细胞周期与凋亡检测自研试剂基因质粒病毒免费送细胞库动物饲料公司新闻案例库漂亮SCI科研转化成果价值金字塔三元悖论为客户赢得荣誉诚觅英才内部推荐加入我们留言板皇冠赌场我们推荐朋友SCI论文发表奖励制度科研资助促销活动
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618Party On

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活动规则


活动主题:CCK-8试剂(0.5mL)6.18元包邮!

活动时间:2018年6月15日—6月28日

活动规则:每个ID限购10支,同时凡是在锐赛做细胞相关的单项/整体实验项目,细胞和相关试剂一!律!免!费!

适用范围:仅限微信终端客户

参与方式:公众号直接回复:CCK8秒杀618+姓名+电话+工作单位,或直接拨打021-64197338咨询工作人员


CCK-8说明书

产品皇冠赌场:

CCK-8试剂盒,是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。

WST-8是一种类似于MTT的化合物,在电子耦合试剂1-Methoxy PMS存在的情况下,可以被还原生成橙黄色水溶性的甲臜(Formazan)(图1)。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。


产品优势:

本试剂盒提供了一种灵敏度高、操作简便、使用安全的细胞增殖与毒性检测方法。与传统的MTT实验相比具有明显的优势:

1.CCK-8法是用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测,也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测,或一些药物诱导的细胞生长抑制检测等与细胞活性和增殖相关的实验的一种高灵敏度,无放射性的比色检测法。


2.CCK-8法对细胞无毒性,可多次测定选取最佳测定时间,与MTT方法相比线性范围更宽,灵敏度高。

CCK-8溶液不需配制,可以直接加入到细胞样品中,即开即用,比MTT更加稳定,实验结果重复性好,适合大规模,高通量的样品检测。


3.MTT实验生成的formazan不是水溶性的,需要使用DMSO等有机溶剂溶解;而本方法产生的formazan是水溶性的,不仅省去了溶解步骤,更因此而减少了该操作步骤带来的误差。


贮藏条件:

CCK-8溶液在避光、0-5°C的条件下可以保存1年,若长期不用可在-20°C下避光保存2年。建议分装后保存于-20°C,使用时提前于4°C解冻,请避免反复冻融,否则增加背景值,干扰实验结果。


所需的设备及耗材:

1.   10ul、100-200ul以及多通道移液器        

2.   酶标仪(带有450nm滤光片)        

3.   96孔培养板        

4.   CO2培养箱


使用方法:

1.在96孔板中接种细胞悬液(100ul/孔),通常细胞增殖实验每孔约2000个细胞,细胞毒性实验每孔约5000个细胞,具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等因素决定)。


2.按照实验需要,进行培养并给予0-10ul特定的药物刺激,处理一段适当的时间(例如:6,12,24或48小时)。

每孔加入10ulCCK-8溶液。如果起始的培养体积为200ul,则需加入20ulCCK-8溶液,以此类推。可以用加相应量细胞培养基和CCK-8但不加细胞的孔作为空白对照,若担心所使用的药物会干扰检测,需设置加相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但不加细胞的孔作为空白对照。


3.在细胞培养箱内继续孵育1-4小时,具体时间可以通过预实验确定。预实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测,然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。


4.用酶标仪测定在450nm处的吸光值,若无450nm滤光片,可以使用420-480nm的滤光片。如果样品为高浑浊度的细胞悬液,可以使用大于600nm的波长,例如650nm,作为参考波长进行双波长测定。


5.如果需要暂时不测定O.D值,可以向每孔中加入10ul0.1MHCl溶液或者1%w/v的SDS溶液,避光保存在室温,24小时内吸光度不会发生变化。


注意事项:

1.使用96孔板进行检测时,如果细胞培养时间较长,请注意蒸发问题。可将96孔板外围一圈加培养基、水或PBS保湿。同时,可以把96孔板置于培养箱内靠近水盘的位置以缓解蒸发。


2.培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而不同。在正式实验前,建议先做预实验摸索铺板的细胞数量以及加入CCK-8试剂后的培养时间。


3.铺板时请注意保证每个孔细胞数量均匀,建议铺板过程中注意时常混匀,防止因细胞沉淀造成不均匀。加入CCK-8后请前后左右轻轻晃动培养板数次,使培养基和CCK-8溶液充分混匀。


4.本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应,如果待测物质有氧化性或还原性,可在加CCK-8之前更换新鲜培养基,去掉药物的影响。若药物影响比较小的情况可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。


5.加入CCK-8时,如果细胞培养时间较长,培养基颜色或pH值已变化,建议换用新鲜的培养基。

用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡,否则会干扰测定。


6.本试剂盒系无菌灌装生产。在使用过程中,请在生物安全柜内无菌操作,避免污染。

为了您的健康和安全,请穿着实验服并戴一次性手套或乳胶手套操作。


参考文献:

Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays. Mosmann T (1983).Journal of Immunological Methods. 65:
55–63.

A highly water-soluble disulfonated tetrazolium salt as a chromogenic indicator for NADH as well as cell viability, Talanta 44,1299-1305, 1997.

A Vital Role for Ape1/Ref1 Protein in Repairing Spontaneous DNA Damage in Human Cells, Molecular Cell, 17, 463-470, 2005.

Efficacy of RNAi-induced down-regulation of wild-type FLT3 on NF-kB pathway in THP-1 cell line. Lu J, Yue BH, Wang CM, Bai ST, Sheng GY. Life Science Journal. Vol.5,No.2, 2008.


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