锐赛生物
靶标发现与功能验证基因操作和基因组编辑药物靶标开发生化/细胞水平验证高通量高内涵分析GPCR/核受体检测激酶检测体外药理学体外安全性评价药代动力学毒理学评价药代动力学/毒理学抗肿瘤药理评价代谢类和心脑血管疾病药理评价中枢神经系统药理评价炎症/自身免疫疾病药理评价体内药理学立项成果展示QPCRWB检测ELISA检测甲基化检测SNP检测高效液相色谱法(HPLC)蛋白质谱基因芯片核酸、蛋白分析服务目的基因的ORF克隆化学合成质粒载体构建siRNA的细胞转染及筛选技术服务shRNA载体构建及筛选技术服务RNAi病毒包装及筛选技术服务miRNA的表达载体构建及病毒包装载体构建及筛选服务chipchip-seqIPCO-IPRNA免疫共沉淀(RIP)RNA pull down免疫共沉淀实验服务慢病毒包装腺病毒包装细胞培养原代细胞分离干细胞诱导分化CCK-8检测流式周期检测流式凋亡检测流式分选细胞流式鉴定细胞表面抗体活性氧(ROS)检测线粒体膜电位检测transwell检测管腔形成实验细胞黏附实验细胞克隆形成实验细胞免疫荧光检测稳转株构建双荧光素酶检测细胞干性成球能力磁珠分选细胞MDA(丙二醛)检测酶活动力学检测HDA检测细胞实验服务常规化学染色免疫组化(IHC)免疫荧光(IF)原位杂交(ISH)荧光原位杂交(FISH)原位末端标记染色(TUNEL)组织样本处理拍照处理病理学检测服务裸鼠皮下成瘤(CDX模型)人源肿瘤移植模型(PDX模型)糖尿病/肥胖模型心血管类疾病模型肾脏疾病模型肝脏疾病模型炎症与自身免疫疾病模型呼吸系统疾病模型其他疾病模型动物实验服务u.cad癌症筛查检测全外显子组基因检测其他疾病基因检测生物信息数据分析服务肿瘤学领域研究平台病理学中心实验室心血管与代谢领域疾病研究平台炎症与自身免疫疾病领域研究平台特发肺纤维化疾病领域研究平台抗体药物一体化临床前研发平台药性评价平台POLOdeliverer3000CCK-8Annexin V-FITCAnnexin V-RFPECL 发光液细胞周期与凋亡检测自研试剂基因质粒病毒免费送细胞库动物饲料公司新闻案例库漂亮SCI科研转化成果价值金字塔三元悖论为客户赢得荣誉诚觅英才内部推荐加入我们留言板皇冠赌场我们推荐朋友SCI论文发表奖励制度科研资助促销活动

化学合成

Chemical translation



实验原理


基因的化学合成即人工合成寡核甘酸片段,通过PCR拼接的方法,获得所需要的基因表达序列或者启动子等功能性元件片段。基因化学合成使合成任何基因序列成为可能。


技术应用


序列密码子优化,高效表达目的基因

基因、蛋白功能研究


实验流程




实物

数据信息

实验周期

客户提供

目的基因NCBI登陆号

4周

我们提供

质粒/菌株

基本实验步骤、电池图片、测序报告


实验结果展示


QQ图片2.png

1.2目的片段的酶切电泳结果(载体片段4700bp,目的片段900bp)


TROUBLESHOOTlNG


实验问题

原因

推荐解决方法

PCR扩增非特异性条带过多?

PCR反应条件

建议提高退火温度。

PCR扩增目标条带过弱?

PCR反应条件

建议增加DNA聚合酶的量或镁离子浓度。

PCR未能扩增得到目标序列?

复杂基因结构

基因序列中存在复杂的二级结构,GC含量过高,串联重复序列都可能导致扩增失败。

测序结果中含有很多突变位点?

聚合酶保真度

采用高保真聚合酶进行扩增。

长片段引物纯度低

重新合成长片引物


常见问题 FAQ


Q:基因化学合成相对基因调取有哪些优势?

A :化学合成法虽不如基因调取(ORF)价格便宜,但在以下情况下具有无法比拟的优势:1)基因表达丰度低,难以通过ORF克隆获得目的基因序列;2)对序列进行密码子优化以提高表达量,如在原核表达系统中表达真核基因序列;3)化学合成序列与目标序列完全一致,不存在突变位点或SNP4)用于微芯片的大量cDNA合成。


Q:可否将需要的酶切点位点增加至基因两端?

A:可以根据客户的后期实验需求,在目的基因两端增加合适的限制性内切酶切位点,客户获得基因克隆后可直接通过酶切亚克隆至所需的载体中,方便快捷,避免了长片段PCR扩增产生点突变的可能。


Q:什么是Kozak序列,为什么建议增加在基因起始密码子前?

A:科学家Kozak通过研究起始密码子ATG周边碱基定点突变后对转录和翻译所造成的影响,总结出在真核生物中起始密码子两端序列为:

G/N-C/N-C/N-ANNATGG,如GCCACCATGG、GCCATGATGG时转录和翻译效率最高,特别时-3位的A对翻译效率非常重要。因此这些序列被成为Kozak序列,常被应用于表达载体的构建中。


Q:进行蛋白表达时,可否增加蛋白分泌信号肽?

A蛋白胞外分泌表达时,采用经优化的蛋白分泌信号肽是提高蛋白产量的重要途径之一。注意信号肽与靶蛋白的连接,不要由于错误的连接导致移码后不能够正常表达信号肽后面的靶蛋白。


Q:我应该如何读取测序报告?

A测序结果中有两种文件类型:

“.sep”是基因序列文件,可以用记事本或DNAMAN等生物学软件打开;

“.ab1:是测序峰图文件,可以用chromas软件大扩,如图1.3所示:

QQ图片3.png

图1.3测序报告截图


参考文献

1. J e a n  P e c c o u d. G e n e S y n t h e s i s: M e t h o d s and Protocols. Humana Press,2012.

2. Benjamin Lewin. Genes IX [M]. Pearson Education,2007.

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