锐赛生物
靶标发现与功能验证基因操作和基因组编辑药物靶标开发生化/细胞水平验证高通量高内涵分析GPCR/核受体检测激酶检测体外药理学体外安全性评价药代动力学毒理学评价药代动力学/毒理学抗肿瘤药理评价代谢类和心脑血管疾病药理评价中枢神经系统药理评价炎症/自身免疫疾病药理评价体内药理学立项成果展示QPCRWB检测ELISA检测甲基化检测SNP检测高效液相色谱法(HPLC)蛋白质谱基因芯片核酸、蛋白分析服务目的基因的ORF克隆化学合成质粒载体构建siRNA的细胞转染及筛选技术服务shRNA载体构建及筛选技术服务RNAi病毒包装及筛选技术服务miRNA的表达载体构建及病毒包装载体构建及筛选服务chipchip-seqIPCO-IPRNA免疫共沉淀(RIP)RNA pull down免疫共沉淀实验服务慢病毒包装腺病毒包装细胞培养原代细胞分离干细胞诱导分化CCK-8检测流式周期检测流式凋亡检测流式分选细胞流式鉴定细胞表面抗体活性氧(ROS)检测线粒体膜电位检测transwell检测管腔形成实验细胞黏附实验细胞克隆形成实验细胞免疫荧光检测稳转株构建双荧光素酶检测细胞干性成球能力磁珠分选细胞MDA(丙二醛)检测酶活动力学检测HDA检测细胞实验服务常规化学染色免疫组化(IHC)免疫荧光(IF)原位杂交(ISH)荧光原位杂交(FISH)原位末端标记染色(TUNEL)组织样本处理拍照处理病理学检测服务裸鼠皮下成瘤(CDX模型)人源肿瘤移植模型(PDX模型)糖尿病/肥胖模型心血管类疾病模型肾脏疾病模型肝脏疾病模型炎症与自身免疫疾病模型呼吸系统疾病模型其他疾病模型动物实验服务u.cad癌症筛查检测全外显子组基因检测其他疾病基因检测生物信息数据分析服务肿瘤学领域研究平台病理学中心实验室心血管与代谢领域疾病研究平台炎症与自身免疫疾病领域研究平台特发肺纤维化疾病领域研究平台抗体药物一体化临床前研发平台药性评价平台POLOdeliverer3000CCK-8Annexin V-FITCAnnexin V-RFPECL 发光液细胞周期与凋亡检测自研试剂基因质粒病毒免费送细胞库动物饲料公司新闻案例库漂亮SCI科研转化成果价值金字塔三元悖论为客户赢得荣誉诚觅英才内部推荐加入我们留言板皇冠赌场我们推荐朋友SCI论文发表奖励制度科研资助促销活动
Annexin V-RFP 细胞凋亡检测试剂盒 用户手册

产品皇冠赌场:

  • 细胞凋亡普遍存在于生物界,是细胞的基本特征之一,对胚胎发育及形态发生、组织修复、内环境的稳定、机体的防御和免疫反应等方面都起到十分重要的作用。

  • AnnexinV-RFP细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-RFP Apoptosis Detection Kit)是用RFP融合的重组人AnnexinV来检测细胞凋亡时出现在细胞膜表面的磷酯酰丝氨酸的一种细胞凋亡检测试剂盒。可以使用流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检测设备进行检测。AnnexinV是一种分子量为35.8kDCa2+依赖性磷脂结合蛋白,广泛分布于真核细胞胞浆内,参与细胞信号转导。AnnexinV 能与磷酯酰丝氨酸(phosphatidylserine,简称PS)高亲和性特异地结合。在正常细胞中,PS主要分布在细胞膜内侧,在细胞发生凋亡的早期,细胞膜上的PS会外翻到细胞表面。用带有红色荧光的AnnexinV-RFP标识出凋亡细胞。

  • 本试剂盒检测的是红色荧光,因此在待检测的细胞已经表达GFP等绿色荧光蛋白的情况下,特别适合使用本试剂盒检测细胞凋亡。

产品包装:

产品货号

产品规格

包装内容

Annexin  V-RFP1×Binding  Buffer

CD004-1

5 assays

25ul

2ml

CD004-2

25 assays

125ul

10ml

CD004-3

200 assays

1ml

80ml

CD004-4

1000  assays

200ml

400ml


保存条件:

4℃保存,AnnexinV-RFP 染色液需避光保存,半年有效。若长期保存,结合液可以-20℃保存。


需自备的试剂及仪器:

  • PBS

  • 蒸馏水或去离子水水平离心机

  • 流式细胞仪或荧光显微镜移液器

使用说明:

A.样品准备

1A.对于悬浮细胞,在进行完细胞凋亡刺激后,1000g离心 5分钟。

1B.对于贴壁细胞,把细胞培养液吸出至合适离心管内(内含已经悬浮的发生凋亡或坏

死的细胞),PBS 洗涤贴壁细胞一次,加入适量胰酶消化细胞。室温孵育至轻轻吹

打可以使细胞吹打下来时,吸除胰酶,避免胰酶消化不够或消化过度。加入收集的

细胞培养液,轻轻吹打均匀,转移到离心管内,1000g 离心 5 分钟。

注意:中晚期凋亡细胞因失去贴壁能力而悬浮于上清中,此部分细胞对于结果是否显著具有重大影响,不可任意丢弃,需离心收集后一起检测才能全面反映出细胞凋亡的整体情况。

注意:胰酶消化时细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

2.弃上清,用 1ml PBS 轻轻重悬细胞并计数(不少于105),然后 1000g 离心5 分钟收集细胞。

注意:PBS 洗涤细胞,洗掉残留的胰酶,否则残留的胰酶会消化并降解 Annexin V-

RFP,最终导致染色失败。

3.加入 400μl1×Binding Buffer 轻轻重悬细胞。

4.加入 5μlAnnexin V-RFP,轻轻混匀,室温避光孵育 15 分钟。

5.在 30 分钟内进行流式细胞仪检测,AnnexinV-RFP 为红色荧光。

6.如果用荧光显微镜下检测,则 1000g 离心5 分钟,收集细胞,用 50-100μl 1×Binding Buffer 轻轻重悬细胞,涂片后,荧光显微镜下观察。

B.流式细胞仪分析

  • 流式细胞仪激发光采用激发波长 545nm,发射波长>575 nm 检测RFP。Annexin V-RFP的红色荧光通过RFP 通道(FL2)检测。细胞应可分成三个亚群:正常活细胞仅有很低的荧光强度,凋亡和坏死细胞有较强的红色荧光。如果要进一步区分凋亡和坏死细胞,可以使用其他细胞凋亡检测试剂盒进行检测。

  • 使用流式细胞仪正确分析 Annexin V-RFP 染色的细胞前要求仪器的荧光补偿来去除两种染料激发光之间的叠加,不同仪器之间的补偿不同。因此需要设置未处理细胞空白对照和经 Annexin V-RFP 单染的细胞、本身表达其他荧光(如GFP)的 3 个对照样本来调整荧光补偿去除光谱重叠。根据对上述 3 个对照的分析设定十字门的位置。补偿样品上机及调整细则如下:

  1. 上样未经染色的细胞,在线性 FS-SS 点图上显示细胞并设门圈出目标细胞群体,选定有效事件区域。建立FL1-FL2 双参数点图并分析以上散点图中设门的细胞,保证>98%的细胞处于在X、Y轴Log1 为边界的左下象限中心区域。

  2. 检测 Annexin V-RFP 单染的细胞并检查FL1-FL2 散点图,保证在左上和右上象限内没有颗粒。如果有颗粒出现在上端象限则说明有荧光渗漏;需降低 FL1PMT 的电压,以有效地去除FL2 的阳性信号。

  3. 检测仅表达如 GFP 荧光的细胞并检查 FL1-FL2 散点图,保证在右上和右下象限内没有颗粒。如果有颗粒出现在右侧象限则说明有荧光渗漏,需降低FL2 PMT 的电压,以有效地去除 FL2 的阳性信号。

  4. 如果在以上调节补偿过程中更改了 PMT 的电压,建议重复2、3步骤。

注意事项:

  • 该试剂盒只能检测活细胞,而不能用于切片、擦刮、固定或浸润细胞样品的检测。细胞凋亡是一种持续变化的动态过程,选择合适的诱导时间对观察凋亡比较重要。

  • 染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。如果有细菌或真菌污染,会严重影响检测效果。

  • PBS洗涤细胞,洗掉残留的胰酶,否则残留的胰酶会消化并降解Annexin V-RFP,最终导致染色失败。

  • 荧光物质均易发生淬灭,在进行荧光观察时,尽量缩短观察时间,同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。

  • 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

  • 检测血液样品时,如果含有血小板,请使用含有 EDTA 的缓冲剂并 200×g 离心洗去血小板。因为血小板含有 PS,能与 Annexin V 结合,从而干扰实验结果。旋盖离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,避免开盖时液体洒落。

  • AnnexinV-RFP是光敏物质,在操作时请注意避光。

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